Ero SDS-sivun ja Western Blot -sovelluksen välillä

Avainero - SDS-sivu vs. Western Blot
 

Western blotting on tekniikka, joka havaitsee spesifisen proteiinin proteiininäytteestä. Tämä tekniikka suoritetaan useiden avainvaiheiden avulla: geelielektroforeesi, blottaus ja hybridisaatio. Natriumdodekyylisulfaatti-polyakryyliamidigeelielektroforeesi (SDS-sivu) on eräänlainen geelielektroforeesitekniikka, jota käytetään proteiinien erottamiseen niiden koon (molekyylipainojen) mukaan. Western blot on erityinen arkki blottauskalvosta, jota käytetään siirtämään sama proteiinikuvio SDS-sivulla. Keskeinen ero SDS-sivun ja Western blotin välillä on se SDS-sivu sallii proteiinien erottamisen seoksessa sillä aikaa Western blot mahdollistaa spesifisen proteiinin havaitsemisen ja kvantifioinnin seoksesta. Molemmat ovat hyödyllisiä proteiinianalyysitutkimuksissa.

SISÄLLYS
1. Yleiskatsaus ja keskeiset erot
2. Mikä on SDS-sivu
3. Mikä on Western Blot
4. Vertailu rinnakkain - SDS-sivu vs. Western Blot
5. Yhteenveto

Mikä on SDS-sivu?

SDS Page on geelielektroforeesitekniikka, jota käytetään proteiinien erottamiseen. Sitä käytetään yleisesti biokemiassa, genetiikassa, oikeuslääketieteessä ja molekyylibiologiassa. Kun proteiinit on uutettu näytteestä, niitä ajetaan geelillä, joka koostuu SDS: stä ja polyakryyliamidista. SDS on anioninen pesuaine, jota käytetään proteiinien (denaturoivien proteiinien) linearisointiin ja negatiivisen varauksen antamiseen linearisoituihin proteiineihin suhteessa niiden molekyylimassaan. Polyakryyliamidista tulee kiinteä alusta geelille. Denaturoidut proteiinit, jotka ovat negatiivisesti varautuneita, siirtyvät kohti laitteen positiivista päätä geelin läpi. Proteiinien koon mukaan siirtymisnopeudet eroavat proteiineista ja tapahtuu erottelu. Siksi SDS-sivu on hyödyllinen yksittäisten proteiinien erottamiseen niiden koon perusteella.

Polyakryyliamidigeelin valmistaminen proteiinien fraktioimiseksi on ratkaiseva vaihe SDS-sivulla. Polyakryyliamidin oikea konsentraatio ja käytetyn silloitusaineen tyyppi vaikuttavat voimakkaasti geelin fysikaalisiin ominaisuuksiin, mikä tekee eri proteiinien tosiasiallisesta erotuksesta. Geelin huokoskokoja tulisi hallita asianmukaisesti tehokkaan erotuksen aikaansaamiseksi. SDS-sivua pidetään kuitenkin korkean resoluution proteiinien erotustekniikana.

SDS-sivutekniikalla on merkittävä rajoitus proteiinianalyysissä. Koska SDS denaturoi proteiinit ennen erottelua, se ei salli entsymaattisen aktiivisuuden, proteiineja sitovien vuorovaikutusten, proteiini kofaktorien jne. Havaitsemista..

Kuva 01: SDS-sivu

Mikä on Western Blot?

Western blotting -tekniikka mahdollistaa spesifisen proteiinin havaitsemisen proteiiniseoksesta ja proteiinin määrän ja molekyylipainon mittaamisen. Western blot on membraani, jota käytetään blottausproseduurin aikana saadakseen peilikuvan proteiinikuvioista SDS-polyakryyliamidigeelissä. Kalvo, jota käytetään Western-blottaukseen, koostuu pääosin nitroselluloosasta tai polyvinylideenidifluoridista (PVDF). Kalvoa siirretyn proteiinin kanssa voidaan käyttää halutun proteiinin tunnistamiseen. Se vaatii korkealaatuista vasta-ainetta halutun proteiinin havaitsemiseksi hybridisaatiolla. Vasta-aine sitoutuu spesifiseen antigeeniinsa ja paljastaa halutun antigeenin, joka on proteiini, läsnäolon.

Proteiinien siirtäminen SDS-polyakryyliamidigeelistä Western-blottiin suoritetaan sähköblottauksella. Se on tehokas ja nopea menetelmä, joka aiheuttaa proteiinien elektroforeesin geelistä ja siirtymisen nitroselluloosakalvolle (Western blot).

Kuva 02: Western blot

Mitä eroa on SDS-sivulla ja Western Blotilla??

SDS-sivu vs. Western Blot
SDS-sivu on geelielektroforeesimenetelmä.	Western blot on tekniikka, joka suoritetaan kalvolle spesifisen proteiinin havaitsemiseksi seoksesta.
Käyttää
SDS-sivu sallii proteiinien erottamisen niiden koon mukaan.	Western blot mahdollistaa proteiinien siirron SDS-sivugeelillä muuttamatta sen mallia ja sallii hybridisaation spesifisten vasta-aineiden kanssa.
haitat
Proteiinin denaturointi, korkeat kustannukset ja neurotoksiinikemikaalien läsnäolo ovat tämän tekniikan haittoja.	Tämä tekniikka on aikaa vievä ja vaatii hyviä kokemuksia henkilökohtaisista ja erityisistä hallituista olosuhteista.

Yhteenveto - SDS-sivu vs. Western Blot

SDS-sivu ja Western blot ovat kaksi menetelmää, jotka liittyvät proteiinianalyysiin. SDS-sivu mahdollistaa proteiinien helpon erottamisen geelissä niiden molekyylipainon mukaan. Western blot auttaa varmistamaan spesifisen proteiinin läsnäolon ja määrän hybridisaation avulla spesifisten vasta-aineiden kanssa. Tämä on ero SDS-sivun ja Western blotin välillä.

Viitteet:
1. Blancher, C. ja A. Jones. “SDS-sivu ja Western blotting -tekniikat.” Menetelmät molekyylilääketieteessä. Yhdysvaltain kansallinen lääketieteellinen kirjasto, n.d. Web. 27. maaliskuuta 2017
2. Nowakowski, Andrew B., William J. Wobig ja David H. Petering. "Alkuperäinen SDS-PAGE: Korkearesoluutioinen proteiinien erotus proteiineilla pitämällä alkuperäisominaisuudet mukaan lukien sitoutuneet metalli-ionit." Metallomiikka: integroitu biometalitiede. Yhdysvaltain kansallinen lääketieteellinen kirjasto, toukokuu 2014. Web. 27. maaliskuuta 2017.

Kuvan kohteliaisuus:
1. ”SDS-PAGE-elektroforeesi” Bensaccountin englanninkielisessä Wikipediassa (CC BY 3.0) Commons Wikimedian kautta
2. ”Western blot 114A” kirjoittanut Amanthabagdon - Oma työ (julkinen alue) Commons Wikimedian kautta