Ero PCR n ja reaaliaikaisen PCR n välillä

PCR vs. Reaaliaikainen PCR

PCR tai polymeraasiketjureaktio on mullistettu löytö nykyajan molekyylibiologiassa, jonka kemisti Kary Mullis kehitti ensin vuonna 1983. Se mahdollistaa monimutkaisen DNA: n yhden sekvenssin monistamisen analysointia varten. PCR: n perusidea on, että kaksi aluketta, jotka ovat komplementaarisia DNA-sekvenssin vastakkaisille juosteille, ovat suunnatut toisiaan kohti; alukkeet tuottavat komplementaarisia juosteita, joista kukin sisältää toisen alukkeen. Siksi tuloksena on suuri määrä sekvenssiä, joka vastaa DNA: ta, joka sijaitsee kahden alukkeen välissä. DNA-polymeraasientsyymiä käytetään pidentämään alukkeita PCR: ssä. DNA-polymeraasi on lämpöstabiili entsyymi, ja sillä on kyky selviytyä korkeissa lämpötiloissa (94 - 95 ° C), joita käytetään templaatti-DNA: n denaturointiin.

PCR käsittää kolme vaihetta, nimittäin toistetut denaturointikierrokset, alukkeiden hehkuttaminen ja DNA: n synteesi. Tämän reaktion suorittamiseen käytetään lämpösyklilaitetta, jotta se voidaan ohjelmoida muuttamaan lämpötilaa nopeasti ja tarkasti. PCR: n sovelluksia ovat rikostutkimukset, DNA: n sormenjäljet, patogeenien havaitseminen ja varhaisten ihmislajien DNA: n analyysi.

Mikä on tavanomainen PCR?

Tavanomaisessa PCR: ssä on kolme päävaihetta, nimittäin; DNA-monistusvaihe, PCR: n erottaminen ja tuotteiden havaitseminen. DNA-segmentit erotetaan tyypillisesti agaroosigeelielektroforeesilla. Sitten tuotteet värjätään eteimiimibromidilla. Lopuksi havaitseminen saavutetaan visualisoimalla nauhat geeleihin UV-valossa. Siksi tavanomaisen PCR: n lopullisia tuloksia ei ilmaista lukuina. Tavallisesti tavanomainen PCR pystyy havaitsemaan vain yhden parametrin.

Mikä on reaaliaikainen PCR?

Reaaliaikainen PCR voi havaita tuotteiden monistuksen, kun tuotteet syntetisoidaan. Teknologian kehityksen myötä PCR: stä on tullut erittäin suosittu tekniikka, etenkin bakteerien havaitsemiseksi ja tunnistamiseksi elintarvikkeissa. Reaaliaikainen PCR käyttää fluoresoivaa värjäysjärjestelmää ja lämpösyklää, joka on varustettu fluoresoivalla havaitsemisominaisuudella.

Mitä eroa on tavanomaisen PCR: n ja reaaliaikaisen PCR: n välillä??

• Tavanomainen PCR on aikaa vievämpi, koska siinä käytetään geelielektroforeesia monistettujen PCR-tuotteiden analysoimiseksi. Sitä vastoin reaaliaikainen PCR on vähemmän aikaa vievä, koska se voi havaita amplifikaatiot reaktion varhaisissa vaiheissa.

• Reaaliaikainen PCR kerää tietoja PCR: n eksponentiaalisessa kasvuvaiheessa, kun taas perinteinen PCR kerää tietoja reaktion loppupisteessä.

• Tavanomaisen PCR: n lopputulokset eivät ehkä ole kovin tarkkoja, mutta reaaliaikaisen PCR: n tulokset ovat erittäin tarkkoja.

• Reaaliaikainen PCR on herkempi kuin perinteinen PCR.

• Tavanomaisella PCR: llä on erittäin heikko resoluutio, kun taas reaaliaikainen PCR pystyy havaitsemaan erittäin pienet muutokset korkean resoluution vuoksi.

• Perinteisen PCR: n loppupisteentunnistuksella on lyhyt dynaaminen alue, kun taas reaaliaikaisella PCR-havainnolla on laaja dynaaminen alue.

• Toisin kuin tavanomainen PCR, automatisoidut havaitsemistekniikat löytyvät reaaliaikaisesta PCR: stä.

• Tavanomainen PCR on erittäin hienostunut ja työvoimavaltainen enemmän kuin reaaliaikainen PCR.

• Toisin kuin reaaliaikainen PCR, tavanomainen PCR ei voi erottaa kuolleita ja eläviä bakteereja.

• Reaaliaikainen PCR käyttää fluoresoivaa väriainejärjestelmää tuotteiden havaitsemiseen, kun taas tavanomainen PCR käyttää etidiumbromidia ja UV-valoa juovien visualisoimiseksi agaroosigeeliväliaineessa.