Ero nitroselluloosan ja PVDF n välillä

Avainero - nitroselluloosa vs PVDF

Western blotting on menetelmä, joka mahdollistaa spesifisten proteiinien havaitsemisen ja kvantifioinnin proteiininäytteestä. Tekniikan luotettavuus riippuu oikean kalvon valinnasta proteiinien absorboimiseksi geelistä. Mikrohuokoisia kalvoja on erityyppisiä. Nitroselluloosa- ja PVDF-kalvot ovat kaksi sellaista kalvoa, jota tutkijat pitävät parempana johtuen niiden erityisominaisuuksista muun tyyppisiin kalvoihin nähden. Valinta nitroselluloosan tai PVDF: n välillä on myös toinen haaste Western-blottauksessa. Sekä nitroselluloosalla että PVDF: llä on korkea proteiinin absorptiokyky. Keskeinen ero nitroselluloosan ja PVDF-kalvon välillä on se nitroselluloosamembraaneilla ei ole kykyä irrottaa vasta-aineita ja kalvon uudelleenkäyttö vasta-aineiden uusimiseksi, kun taas PVDF-kalvoilla on strippaus- ja uudelleenkäyttökyky.

SISÄLLYS
1. Yleiskatsaus ja keskeiset erot
2. Mikä on nitroselluloosa
3. Mikä on PVDF
4. Vertailu rinnakkain - nitroselluloosa vs PVDF
5. Yhteenveto

Mikä on nitroselluloosa?

Nitroselluloosa on polymeeri, jota valmistetaan käsittelemällä selluloosaa typpihapolla, ja sitä käytetään mikrohuokoisten membraanien valmistukseen molekyylibiologiassa, erityisesti blottaustekniikoissa, kuten eteläinen, pohjoinen ja länsimainen blottaus. Nitroselluloosamembraanien huokoskoot ovat välillä 3 - 20 um. Nitroselluloosan mikrohuokoiset kalvot helpottavat kalvon pinnalla tapahtuvan immunokemiallisen reaktion havaitsemista. Siksi nitroselluloosamembraaneja käytetään usein proteiinien immobilisointiin ja spesifisten proteiinien havaitsemiseen Western blot -menetelmässä. Nitroselluloosamembraanit voivat myös immobilisoida glykoproteiineja ja nukleiinihappoja.

Nitroselluloosakalvot ovat edullisia sivuttaisvirtausmäärityksissä useiden ominaisuuksien takia. Nitroselluloosamembraanit imevät proteiineja korkeana pitoisuutena. Kalvon kostuttamiseen käytetty liuotin ei vähennä nitroselluloosamembraaniproteiinin imeytymistä. Nitroselluloosamembraanit voidaan leikata helposti haluttuun geelikokoon ja siirtää proteiineja geelistä kalvoon sähkö- tai kapillaarisiirrolla. Nitroselluloosa mahdollistaa proteiinien nopeamman virtauksen kalvon läpi, jolla on suuri sitoutumispotentiaali. Nitroselluloosa osoittaa parantuneen käsittelyn lujuuden. Toinen nitroselluloosamembraanin erityinen ominaisuus on, että se voidaan helposti liimata vedettömillä liuottimilla, jotka eivät liukene liimoihin, erilaisiin muovialustoihin..

Kuvio 01: Nitroselluloosakalvo Western blottausta varten

Mikä on PVDF?

Polyvinylideenidifluoridi (PVDF) on fluoripolymeeri, jota tuotetaan vinylideenidifluoridin polymeroinnilla, ja jolla on korkea proteiinien immobilisointikyky. Siksi PVDF: stä valmistettuja mikrohuokoisia kalvoja käytetään Western blot -tekniikoissa spesifisten proteiinien analysoimiseksi proteiiniseoksista. PVDF-kalvoja voidaan käyttää myös aminohappoanalyyseihin ja proteiinien sekvensointiin. Tärkein PVDF-kalvon ominaisuus nitroselluloosakalvon päällä on, että se voidaan helposti erottaa vasta-aineista ja käyttää sitä uudelleen vasta-ainekoettimiin.

PVDF-kalvot ovat paksumpia kuin nitroselluloosakalvot; siten kestävämpi vaurioilta uudelleenkäytön aikana. PVDF-kalvot ovat erittäin hydrofobisia. Siksi ne on liotettava metanoliin tai isopropanoliin ennen käyttöä.

Mikä on ero nitroselluloosan ja PVDF: n välillä??

Nitroselluloosa vs PVDF
Nitroselluloosa on polymeeri, joka koostuu selluloosasta.	PVDF on fluoripolymeeri, joka tuotetaan vinylideenidifluoridin polymeroinnilla.
Kalvon huokoskoko
Tyypilliset huokoskoot ovat 0,1, 0,2 tai 0,45 μ	Tyypilliset huokoskoot ovat 0,1, 0,2 tai 0,45 um
Proteiinien sitomiskyky
Nitroselluloosan proteiineihin sitoutumiskapasiteetti on 80 - 100 μg / cm².	PVDF: n proteiineihin sitoutumiskapasiteetti on 170-200 μg / cm².
Herkkyys
Tämän herkkyys on alhainen verrattuna PVDF: ään.	Tällä on korkea herkkyys.
Heikosti ekspressoitujen proteiinien havaitseminen
Koska herkkyys on alhainen nitroselluloosakalvoissa, se ei sovellu heikosti ekspressoitujen proteiinien havaitsemiseen.	Tämä sopii paremmin vähän ilmentyneiden proteiinien havaitsemiseksi korkean herkkyytensä takia.
Taustamelu
Tällä on alhaisempi taustamelu	Tässä on korkeampi taustamelu.
Yhteisvaikutukset proteiinien kanssa
Proteiinimolekyylit sitoutuvat nitroselluloosakalvoihin hydrofobisten vuorovaikutusten kautta.	Proteiinit sitoutuvat PVDF-kalvoihin hydrofobisten ja dipolisten vuorovaikutusten kautta.
Kalvon luonne
Nitroselluloosa on hauras ja herkkä. Nitroselluloosaversioita on kuitenkin saatavana ja ne ovat kestäviä.	PVDF on kestävämpi ja sillä on korkeampi kemiallinen kestävyys.
Kyky poistaa ja käyttää uudelleen
Nitroselluloosalla voi olla vaikeuksia strippaamisessa ja uusimisessa menettämättä signaalia.	PVDF on ihanteellinen sovellusten uusintaan ja sekvensointiin.
sopivuus
Nitroselluloosa on ihanteellinen pienimolekyylipainoisten proteiinien havaitsemiseksi.	PVDF on sopivampi suuremman molekyylipainon proteiinien havaitsemiseksi.
Muut käyttötavat
Nitroselluloosaa voidaan käyttää nukleiinihappoanalyyseihin ja piste- / rako- blottaukseen.	PVDF: tä voidaan käyttää proteiinisekvensointiin ja kiinteiden faasien määritysjärjestelmiin.
Kustannus
Tämä on halvempaa kuin PVDF-kalvot.	Tämä on kalliimpaa kuin nitroselluloosakalvot.
Esikostutuksen tarve
Nitroselluloosakalvot eivät vaadi esiliuotusta metanolilla	PVDF-kalvot vaativat esiliuotuksen metanolilla.

Yhteenveto - nitroselluloosa vs PVDF

Nitroselluloosamembraanit olivat ensimmäisiä kalvoja, joita käytettiin kaupallisesti sivuttaisvirtausmääritykseen. Heillä on suuri kyky absorboida proteiineja. Siksi nitroselluloosamembraaneja käytetään Western-blottauksessa. PVDF on toinen membraanityyppi, jota käytetään Western-blottauksessa, ja sillä on myös korkea proteiinin imeytymiskyky. Molempia tyyppejä käytetään Western-blottauksessa proteiinianalyysissä. PVDF-kalvoilla on kuitenkin erityisominaisuuksia, mikä tekee niistä sopivampia kuin nitroselluloosamembraanit Western blottaukseen. Mutta nitroselluloosamembraanit ovat sopivampia pienimolekyylipainotettujen proteiinien havaitsemiseksi, PVDF-membraanit ovat sopivampia suurimolekyylipainotettujen proteiinien havaitsemiseksi. Tämä on ero nitroselluloosan ja PVDF-kalvojen välillä.

Kuvan kohteliaisuus:
1. ”Western blot transfer” - Bensaccount englanniksi Wikipediasta (CC BY 3.0) Commons Wikimedian kautta

Viite:
1.Luque-Garcia, Jose L., Ge Zhou, Tung-Tien Sun ja Thomas A. Neubert. "Nitroselluloosamembraanien käyttö proteiinien karakterisointiin matriisi-avusteisella lasersorptiolla / ionisaatiospektrometrialla." Analyyttinen kemia. Yhdysvaltain kansallinen lääketieteellinen kirjasto, 15. heinäkuuta 2006. Web. 28. maaliskuuta 2017
2. ”Molekyylimarkkerit ja kasvien bioteknologia.” Google-kirjat. N.p., n.d. Web. 28. maaliskuuta 2017
3.Torstai, 8. huhtikuuta 2013 Tweet. "Taikuudet kalvossa: Valitse viisaasti Best Western Blot -tuloksille." Biocompare. N. 8., 8. huhtikuuta 2013. Web. 28. maaliskuuta 2017

Tiede ja luonto