Ero suoran ja epäsuoran immunofluoresenssin välillä

avainero suoran ja epäsuoran immunofluoresenssin välillä on, että suora immunofluoresenssi käyttää yhtä vasta-ainetta, joka toimii kiinnostuksen kohteena olevaa kohdetta vastaan, kun taas epäsuora immunofluoresenssi käyttää kahta vasta-ainetta kiinnostavan kohteen merkitsemiseen.

Immunofluoresenssi tai solujen kuvantaminen on tekniikka, jota käytetään erityisen kohdeantigeenin leimaamiseen fluoroforilla. Tässä fluorofori on fluoresoiva kemiallinen yhdiste, joka voi emittoida valoa uudelleen valon herätessä. Kun fluorofori sitoutuu kohdeantigeeniin, se mahdollistaa kohdemolekyylin havaitsemisen näytteessä. Sen kuvaamiseksi edelleen, kun antigeeni sitoutuu spesifiseen vasta-aineeseen, se voidaan konjugoida fluoroforeilla. Siksi on helppo havaita kohdeantigeenin läsnäolo näytteessä tarkkailemalla fluoresenssimikroskoopilla.

Lisäksi on olemassa kahta tyyppiä immunofluoresenssia; suora ja epäsuora immunofluoresenssi. Ero suoran ja epäsuoran immunofluoresenssin välillä on pääasiassa käytettyjen vasta-aineiden lukumäärässä ja fluoroforikonjugaatiossa. Eli suorassa immunofluoresenssissa fluorofori konjugoituu suoraan primaariseen vasta-aineeseen, kun taas epäsuorassa immunofluoresenssissa, fluorofori konjugoituu sekundaarisen vasta-aineen kanssa.

SISÄLLYS

1. Yleiskatsaus ja keskeiset erot
2. Mikä on suora immunofluoresenssi
3. Mikä on epäsuora immunofluoresenssi
4. Suoran ja epäsuoran immunofluoresenssin yhtäläisyydet
5. Vertailu rinnakkain - suora ja epäsuora immunofluoresenssi taulukkomuodossa
6. Yhteenveto

Mikä on suora immunofluoresenssi?

Immunofluoresenssi käyttää vasta-aineita spesifisten kohdeantigeenien havaitsemiseen. Suora immunofluoresenssi on yksi kahdesta immunofluoresenssityypistä. Suorassa immunofluoresenssissa yksi vasta-aine (primaarinen vasta-aine) osallistuu ja fluorofori konjugoituu suoraan primaarisen vasta-aineen kanssa. Kun vasta-aine on sitoutunut kohdeantigeeniin, fluorofori emittoi fluoresenssia, joka voidaan havaita fluoresenssimikroskoopilla.

Kuvio 01: Suora immunofluoresenssi

Suora immunofluoresenssi on kuitenkin kallis menetelmä, koska primaarit konjugoidut vasta-aineet ovat kalliita verrattuna sekundaarisiin vasta-aineisiin. Siitä huolimatta se ei sisällä ylimääräistä vaihetta, siis lyhyempää tekniikkaa. Lisäksi epäspesifiset sitoutumiset vähenevät suorassa immunofluoresenssissa. Siksi lajien ristireaktiivisuus on alhainen. Mutta havaitsemisessa suoran immunofluoresenssin herkkyys on heikko verrattuna epäsuoraan immunofluoresenssiin .

Mikä on epäsuora immunofluoresenssi?

Epäsuora immunofluoresenssi on immunofluoresenssin toinen tyyppi, johon sisältyy kahden tyyppisiä vasta-aineita, kuten primaariset ja sekundaariset vasta-aineet, kohdeantigeenin merkinnöissä. Tässä menetelmässä fluorofori konjugoituu sekundaarisen vasta-aineen kanssa. Siksi tämä tekniikka sisältää lisävaiheen.

Kuvio 02: immunofluoresenssi

Herkkyys on kuitenkin tässä menetelmässä korkea, koska useita fluoroforeja voidaan konjugoida sekundaarisiin vasta-aineisiin ja se helpottaa havaitsemista. Lisäksi epäsuora immunofluoresenssi on halvempaa johtuen tosiasiasta, että sekundaaristen vasta-aineiden konjugointi on halvempaa ja helpompaa. Verrattuna suoraan immunofluoresenssiin, lajien ristireaktiivisuus on korkea epäsuorassa menetelmässä.

Mitkä ovat samankaltaisuudet suoran ja epäsuoran immunofluoresenssin välillä?

• Ne ovat kahta tyyppiä immunofluoresenssitekniikkaa.
• Primaariset vasta-aineet ja fluorofori ovat molemmissa menetelmissä mukana.
• Lisäksi antigeeni-vasta-ainereaktio esiintyy molemmissa menetelmissä.
• Lisäksi sekä suorassa että epäsuorassa immunofluoresenssissa käytetään fluoresenssimikroskooppia antigeenin havaitsemiseksi.

Mikä on ero suoran ja epäsuoran immunofluoresenssin välillä?

Immunofluoresenssi voi olla suora tai epäsuora perustuen fluoroforikonjugaatioon käytettyjen vasta-aineiden kanssa. Suorassa immunofluoresenssissa fluorofori konjugoituu primaarisen vasta-aineen kanssa, joka on yksittäinen vasta-aine, joka liittyy tähän tekniikkaan. Sitä vastoin epäsuorassa immunofluoresenssissa fluorofori konjugoituu sekundaarisen vasta-aineen kanssa, joka on yksi kahdesta tyypistä vasta-aineita, jotka liittyvät tekniikkaan. Siksi tärkein ero suoran ja epäsuoran immunofluoresenssin välillä on vasta-ainetyyppi, joka konjugoituu fluoroforin kanssa.

Seuraava infografia tarjoaa vertailun suoran ja epäsuoran immunofluoresenssin välisestä erotuksesta.

Yhteenveto - suora ja epäsuora immunofluoresenssi

Immunofluoresenssi on tekniikka, jota käytetään spesifisten antigeenien havaitsemiseen näytteessä. Tämä tekniikka käyttää spesifisiä vasta-aineita. Siksi tässä vasta-aineet konjugoituvat fluoroforien kanssa niiden havaitsemiseksi fluoresoivalla mikroskoopilla. Lisäksi immunofluoresenssia on kahta tyyppiä, nimittäin suora ja epäsuora immunofluoresenssi. Suoraan immunofluoresenssiin sisältyy yksi vasta-aine ja fluorofori, joka on konjugoitu suoraan tähän vasta-aineeseen. Epäsuoraan immunofluoresenssiin liittyy kaksi vasta-ainetta; primaarinen ja sekundaarinen ja fluorofori, joka on konjugoitu sekundaariseen vasta-aineeseen. Koska useat sekundaariset vasta-aineet voivat sitoutua primaariseen vasta-aineeseen ja useat fluoroforit voivat konjugoitua sekundaaristen vasta-aineiden kanssa, epäsuora immunofluoresenssi on herkempi menetelmä kuin suora menetelmä. Lisäksi epäsuora menetelmä on halvempi kuin suora menetelmä. Siten tämä on ero suoran ja epäsuoran immunofluoresenssin välillä.

Viite:

1. ”Immunofluoresenssi.” Wikipedia, Wikimedia Foundation, 19. elokuuta 2018. Saatavilla täältä 

Kuvan kohteliaisuus:

1. ”HSP IF IgA” kirjoittanut Emmanuelm en.wikipediassa, (CC BY 3.0) Commons Wikimedian kautta
2. ”Immunofluoresenssi” - kirjoittanut Westhayl618 - Oma työ, (CC BY-SA 4.0) Commons Wikimedian kautta