Ero suoran ja epäsuoran ELISA n välillä

Avainero - suora vs epäsuora ELISA
 

Entsyymisidottu immunomääritys (ELISA), joka tunnetaan myös nimellä entsyymiimmunomääritys, on serologinen testi, joka havaitsee vasta-aineet veressä. Sitä käytetään diagnostiikkatyökaluna selvittääkseen, onko potilas altistettu tietyntyyppiselle virukselle tai muulle tartunta-aineelle (antigeenille) ja onko kehossa tuotettu vasta-aineita infektiota vastaan. ELISA voi myös tunnistaa aiemmat ja nykyiset infektiot. Siksi lääkärit käyttävät ELISAa usein esiseulontatestinä ennen sairauksien perusteellista analysointia. Tämä testi voidaan suorittaa laboratoriossa ottamalla potilaalta verinäyte. ELISA-testejä on kahta tyyppiä: suora ELISA ja epäsuora ELISA. Keskeinen ero suoran ja epäsuoran ELISA: n välillä on se epäsuora ELISA on herkempi ja vaatii sekundaarisen vasta-aineen lisäämisen sillä aikaa suora ELISA on vähemmän herkkä ja käyttää vain primaarista vasta-ainetta.

SISÄLLYS
1. Yleiskatsaus ja keskeiset erot
2. Mikä on suora ELISA
3. Mikä on epäsuora ELISA
4. Vertailu rinnakkain - suora ja epäsuora ELISA
5. Yhteenveto

Mikä on suora ELISA?

ELISA on sairauden diagnostiikkatesti, joka suoritetaan tiettyjen antigeenien tai vasta-aineiden esiintymisen havaitsemiseksi veressä. Se tehdään levymäärityksenä. Se käyttää vasta-aineita, jotka on kytketty helposti määritettäviin entsyymeihin. Antigeenien läsnäolo seeruminäytteessä sitoutuu spesifisiin vasta-aineisiin, jotka on kytketty entsyymeihin. Viimeisessä vaiheessa lisätään spesifinen substraatti reagoimaan entsyymin kanssa. Entsyymi muuttaa substraatin värilliseksi tai signaalia tuottavaksi tuotteeksi. Värimuutos kemiallisessa substraatissa paljastaa tietyn vasta-aineen läsnäolon seeruminäytteessä. Suora ELISA-testi käyttää vain entsyymiin kytkettyä primaarista vasta-ainetta. Sitoutuessaan antigeeniin se muuttaa nopeasti väriä, mikä osoittaa tartunnanaiheuttajan esiintymisen veressä. Signaalien intensiteetti on kuitenkin heikompi suoran ELISA: n suhteen, koska epitoopit ovat rajoittuneet antigeenien sitoutumiseen. Siksi suora ELISA on vähemmän herkkä verrattuna epäsuoraan ELISAan.

Kuva 01: Suora ELISA-testi

Mikä on epäsuora ELISA?

ELISA voidaan suorittaa käyttämällä kahden tyyppisiä vasta-aineita, nimittäin; primaarinen vasta-aine ja sekundaarinen vasta-aine. Epäsuora ELISA-työkalu käyttää molemmat tyyppisiä vasta-aineita signaalien monistamiseen paremman havaitsemiseksi. Epäsuora ELISA-tekniikka suoritetaan seuraavasti.

1. Levyjä inkuboidaan antigeenien kanssa ja pestään epäspesifisen sitoutumisen estämiseksi.
2. Sitten lisätään primaarisia vasta-aineita ja pestään.
3. Entsyymiin kytketty sekundaarinen vasta-aine lisätään ja pestään.
4. Substraatti lisätään ja annetaan reagoida entsyymien kanssa.
5. Signaalit havaitaan, ja spesifisen antigeenin esiintyminen tai puuttuminen näytteestä tunnistetaan.

Epäsuorassa ELISA-testissä useita sekundaarisia vasta-aineita voi sitoutua yhteen primaariseen vasta-aineeseen. Sekundääriset vasta-aineet kytketään helposti määritystettäviin entsyymeihin. Siksi yksi sitoutuminen voi antaa voimakkaan signaalin useammasta kuin yhdestä vuorovaikutuksesta johtuen. Siksi epäsuora ELISA on herkempi kuin suora ELISA. Epäsuora ELISA voi kuitenkin tuottaa epäspesifisiä signaaleja sekundaaristen vasta-aineiden ristireaktioiden vuoksi.

Kuva 02: epäsuora ELISA-testi

Mikä on ero suoran ja epäsuoran ELISA: n välillä??

Suora vs. epäsuora ELISA
Suora ELISA on vähemmän herkkä verrattuna epäsuoraan ELISAan.	Epäsuora ELISA on herkempi.
Aika kulunut
Suora ELISA-testi on nopea prosessi.	Epäsuora ELISA on aikaa vievä.
Vasta-aineiden käyttö
Vain yhden tyyppisiä vasta-aineita (primaarisia vasta-aineita) käytetään suorassa ELISA: ssa.	Primaarisia ja sekundaarisia vasta-aineita käytetään epäsuoraan ELISA: han.
Linkki entsyymeihin
Primaariset vasta-aineet on kytketty entsyymeihin.	Toissijaiset vasta-aineet on kytketty entsyymeihin.
Toisten vasta-aineiden ristireaktiivisuus
Suora ELISA eliminoi toisten vasta-aineiden ristireaktiivisuuden.	Epäsuoraan ELISAan vaikuttaa toisten vasta-aineiden ristireaktiivisuus.
signaalit
Signaalit ovat heikkoja verrattuna epäsuoraan ELISAan.	Signaalit vahvistetaan epäsuorassa ELISA: ssa. Siksi se on helppo havaita.

Yhteenveto - Suora vs. epäsuora ELISA

ELISA on biokemiallinen tekniikka, jota käytetään pääasiassa immunologiassa vasta-aineen tai antigeenin havaitsemiseksi potilaan verinäytteessä. Se voidaan suorittaa kahdella prosessilla, jotka tunnetaan nimellä suora tai epäsuora ELISA. Suora ELISA-testi käyttää vain primaarisia vasta-aineita antigeenin havaitsemiseksi, kun taas epäsuora ELISA käyttää sekä primaarisia että sekundaarisia vasta-aineita. Suorassa ELISA: ssa primaariset vasta-aineet leimataan, kun taas epäsuorassa ELISA: ssa sekundaariset vasta-aineet leimataan. Tämä on ero suoran ja epäsuoran ELISA: n välillä.

Viitteet
1. "Entsyymisidottu immunosorbenttimääritys (ELISA)." Tiedote Maailman terveysjärjestöstä. Yhdysvaltain kansallinen lääketieteellinen kirjasto, 1976. Web. 29. maaliskuuta 2017
2. Loon, A. M van, J. T Van Der Logt, F. W. Heessen ja J. Van Der Veen. "Entsyymi-kytketty immunosorbenttimääritys, joka käyttää leimattua antigeeniä immunoglobuliini M- ja A-vasta-aineiden havaitsemiseksi toksoplasmoosissa: vertailu epäsuoraan immunofluoresenssiin ja kaksoiskerrosentsyymisidottuun immunosorbenttimääritykseen." Journal of Clinical Microbiology. Yhdysvaltain lääketieteellinen kirjasto, kesäkuu 1983. Web. 29. maaliskuuta 2017

Kuvan kohteliaisuus:
1. Cavitrin ”ELISA-kaavio” - Oma työ (CC BY 3.0) Commons Wikimedian kautta 
2. ”Epäsuora ELISA” - kirjoittanut Cawang - Oma työ (CC0) Commons Wikimedian kautta