Vektoreita käytetään molekyylikloonauksessa. Vektori voidaan määritellä DNA-molekyyliksi, joka käyttäytyy kuljettimena kuljettamaan vieraita geenimateriaaleja toiseen soluun. Vektori, joka sisältää vieraan DNA: n, tunnetaan yhdistelmä-DNA: na, ja sen tulisi kyetä replikoimaan ja ilmentämään sitä isäntäorganismissa.. Hiivan keinotekoinen kromosomi (YAC) ja bakteerien keinotekoinen kromosomi (BAC) ovat kahta tyyppiä vektoreita, jotka osallistuvat kloonaukseen. Keskeinen ero YAC: n ja BAC: n välillä on se YAC on keinotekoisesti rakennettu vektorijärjestelmä, joka käyttää hiivakromosomin tiettyä aluetta suurten geneettisten materiaalisegmenttien lisäämiseksi hiivasoluihin sillä aikaa BAC on keinotekoisesti rakennettu vektorijärjestelmä, joka käyttää tiettyä aluetta E. coli kromosomi suurten DNA-segmenttien lisäämiseksi E. coli solut.
SISÄLLYS
1. Yleiskatsaus ja keskeiset erot
2. Mitkä ovat YAC-vektorit
3. Mitkä ovat BAC-vektorit
4. Vertailu rinnakkain - YAC vs. BAC-vektorit
5. Yhteenveto
YAC (hiivan keinotekoinen kromosomi) on keinotekoisesti rakennettu kromosomi, jolla on kyky kantaa suuri osa vieraita DNA: ta ja replikoitua hiivasoluissa. Siinä on sentromeeri, telomeerit sekä itsenäisesti replikoivat sekvenssit, jotka ovat välttämättömiä replikaation ja stabiilisuuden kannalta. YAC: lla tulisi myös olla selektiivinen markkeri tai markkerit ja restriktiokohteet, jotta siitä tulisi tehokas kloonausvektori. YAC: iin voidaan insertoida suuri sekvenssi, joka vaihtelee välillä 1000 - 2000 kb, ja siirtää hiivaan. YAC: n muuntotehokkuus on erittäin alhainen.
Kuva 01: YAC-vektori
Bakteerien keinotekoinen kromosomi (BAC) on keinotekoisesti rakennettu kromosomi molekyylikloonausta varten. Sillä on tiettyjä alueita E. coli F-plasmidi ja se on pyöreä ja superkelattu. BAC on kehitetty kloonaamaan DNA-fragmentit bakteereihin, erityisesti E. coli. Se voi kantaa DNA-fragmentteja, joiden koko on enintään 300 kb. YAC: iin verrattuna BAC-kloonauslisäkkeet ovat kooltaan pienempiä. BAC: t kehitettiin vuonna 1992, ja se on edelleen suosittu vakautensa ja helpon rakentamisensa vuoksi. BAC: t ovat hyödyllisiä myös rokotteiden kehittämisessä.
Kuvio 02: BAC-vektori molekyylikloonauksessa
YAC vs. BAC-vektorit | |
YAC on geenimuunnettu kromosomi, jossa käytetään hiiva-DNA: ta kloonausta varten. | BAC on geneettisesti muokattu DNA-molekyyli, joka käyttää E. coli DNA kloonausta varten. |
sukupuoli | |
YAC: t suunniteltiin kloonaamaan suuret genomisen DNA: n fragmentit hiivaan. | BAC: t kehitettiin suurten genomisten fragmenttien kloonaamiseksi Escherichia coliin. |
Lisää pituus | |
YAC: t voivat sisältää megabaasin kokoisia genomisia inserttejä (1000 kb - 2000 kb). | BAC: t voivat kantaa inserttejä, joiden koko on 200-300 kb tai vähemmän. |
rakentaminen | |
YAC-DNA: ta on vaikea puhdistaa ehjänä ja se vaatii suurta pitoisuutta YAC-vektorijärjestelmän muodostamiseksi. | BAC on helppo puhdistaa ehjänä ja se on helppo rakentaa. |
kimerismiä | |
YAC: t ovat usein kimeerisiä. | BAC: t ovat harvoin kimeerisiä. |
pysyvyys | |
YAC on epävakaa. | BAC on vakaa. |
muutoksia | |
Hiivarekombinaatio on erittäin mahdollista ja pysyy aina aktiivisena. Siksi se voi tuottaa poistoja ja muita uudelleenjärjestelyjä YAC: ssa. | E. coli rekombinaatio estetään ja otetaan käyttöön tarvittaessa. Siksi se vähentää ei-toivottuja uudelleenjärjestelyjä BAC: issa. |
ylläpito | |
Yhdistelmä-YAC: ien manipulointi vaatii yleensä YAC: n siirtämisen E. coli myöhempää manipulointia varten. Siksi se on työläs prosessi. | BAC-modifikaatio tapahtuu suoraan E. coli. Joten DNA: n siirtoa ei tarvita. Siksi prosessi ei ole työläs. |
YAC: sta on tullut välttämätön tutkimusväline työssä kloonausprosesseissa, koska se kykenee kloonaamaan suuria DNA-fragmentteja isäntäorganismiin. YAC-yhdisteillä on kuitenkin useita haittoja vektoreina, kuten rakennusvaikeudet, kimeerismi, epävakaus jne. Siksi tutkijat ovat kehittäneet BAC-vektorit näiden ongelmien voittamiseksi. BAC on rakennettu käyttämällä tiettyjä alueita E. coli kromosomi. Se on vakaa vektori ja voidaan helposti rakentaa. DNA: n pituus, jota BAC voi käsitellä, on kuitenkin jopa 20 kertaa lyhyempi kuin YAC: n. Tämä on ero YAC- ja BAC-vektorijärjestelmien välillä. Nykyään BAC on parempi kuin laboratorioissa YAC.
Viitteet
1. Shero, J. H., M. K. McCormick, S. E. Antonarakis ja P. Hieter. "Hiivan keinotekoiset kromosomivektorit tehokkaaksi kloonien manipuloimiseksi ja kartoittamiseksi." Genomics.U.S. Kansallinen lääketieteellinen kirjasto, kesäkuu 1991. Verkko. 25. maaliskuuta 2017
2. Ramsay, M. “Hiivan keinotekoinen kromosomikloonaus.” Molekyylibiotekniikka. Yhdysvaltain kansallinen lääketieteellinen kirjasto, huhtikuu 1994. Web. 25. maaliskuuta 2017
Kuvan kohteliaisuus:
1. “BACs-kloonausvektorit Chem114A” kirjoittanut Tinastella - (CC BY-SA 3.0) Commons Wikimedian kautta