Ero lämpimän ja kylmän trypsinoinnin välillä
Share
Avainero - Lämmin vs. Kylmä trypsinisaation
Lämmin ja kylmä trypsinisointi ovat kaksi menetelmää, joita käytetään solujen entsymaattisessa hajottamisessa eläinsolujen viljelyssä. avainero lämpimän ja kylmän trypsinisaation välillä, kuten nimistä käy ilmi, riippuu lämpötilasta, jossa trypsiiniä lisätään solujen hajoamiseen. Lämmin trypsinisointi tapahtuu korkeammissa lämpötiloissa (36,5-37 ° C) 0C) kun taas kylmä trypsinointi tapahtuu matalassa lämpötilassa.
Eläinsolujen primaarisolujen viljelyprosessin aikana käytetään kolme päämenetelmää, jotka ovat osoittautuneet onnistuneiksi. Kolme menetelmää sisältävät solujen mekaanisen hajottamisen, solujen entsymaattisen hajoamisen ja primaarisen eksplantointitekniikan. Solujen entsymaattinen hajoaminen johtaa solujen eristämiseen, ja sen suorittaa proteiineja hajottava entsyymi trypsiini. Siksi tätä prosessia kutsutaan trypsinisaatioksi. Trypsinisointi voidaan tehdä kahdessa eri tilassa, nimittäin lämmin trypsinisointi ja kylmä trypsinisointi. Lämmin trypsinisointi on menetelmä solujen käsittelemiseksi trypsiinillä lämpimissä olosuhteissa lämpötilassa 36,5 - 37 ° C 0C. Kylmä trypsinisointi on trypsiinikäsittelyprosessi, joka tapahtuu kylmimmissä olosuhteissa mieluiten jäässä pitäen erittäin matalat lämpötilat.
SISÄLLYS
1. Yleiskatsaus ja keskeiset erot
2. Mikä on lämmin trypsinisointi
3. Mikä on kylmä trypsinisointi
4. Lämpö- ja kylmä trypsinisoinnin väliset yhtäläisyydet
5. Vertailu rinnakkain - lämmin vs kylmä trypsinisointi taulukkomuodossa
6. Yhteenveto
Mikä on lämmin trypsinisointi?
Trypsinisaatio voidaan tehdä hajottamaan solukomponentit solujen eristämiseksi primaarisen soluviljelmän tuottamiseksi. Trypsiini on proteiinien hajotusentsyymi, ja trypsinisoinnissa käytetty entsyymiseos voi olla joko raakauute tai puhdistettu tuote. Raakauutteen sanotaan olevan tehokkaampaa proteiinien hajotuksessa ja solujen hajoamisessa, koska se sisältää muita hajottavia entsyymejä.
Lämmin trypsinisaatio on yleisimmin käytetty entsymaattinen menetelmä solujen hajottamiseksi, joka tapahtuu korkeammissa lämpötiloissa. Ennen trypsiinikäsittelyä haluttu kudos pilkotaan pienemmiksi paloiksi. Se helpottaa hajottamista. Pilkottu kudos pestään sitten erityisellä väliaineella, joka tunnetaan nimellä Dissection Basal Salt -väliaine.
Pesuvaiheen päätyttyä solut transformoidaan pulloon, joka sisältää aktiivisen entsyymin, joka on trypsiini. Koska tämä tekniikka edellyttää lämmin trypsiinisointiprotokollaa, trypsiini asetetaan lämpötilaan noin 37 ° C 0C noin neljä tuntia.
Kuva 01: trypsiini
Sisältö sekoitetaan ja sekoitetaan käyttämällä sentrifugointimenetelmiä protokollan helpottamiseksi ja hajottamisprosessin nopeuttamiseksi. Kun suositeltu aika on saavutettu, solut voidaan johtaa supernatantista. Supernatantista johdettuja soluja inkuboidaan sitten tietyssä lämpötilassa ja ajankohtana.
Mikä on kylmä trypsinisointi?
Kylmä trypsinisointi on toisen tyyppinen trypsinisointi, joka tapahtuu kylmissä olosuhteissa. Tässä tekniikassa pilkotut ja pestyt solut laitetaan injektiopulloihin jäällä ja liotetaan sitten trypsiinillä. Liotusjakso on paljon pidempi - noin 6 - 24 tuntia.
Liotusmenettelyn päätyttyä trypsiini poistetaan solulysaatista ja kudospalat inkuboidaan edelleen 37 ° C: ssa. 0C noin 20 - 30 minuutin ajan. Solujen hajoaminen saadaan aikaan kudoseoksen toistuvalla pipetoinnilla. Tämän avulla solut voivat dissosioitua kalvosta ja tulla supernatanttiin. Kun solut ovat supernatantissa, niitä inkuboidaan ja kasvatetaan halutussa lämpötilassa ja ajanjaksossa.
Kylmällä trypsinisointimenetelmällä on useita etuja
- Korkeampi elinkykyisten solujen saanto soluvaurioiden minimoimiseksi. Soluvauriot minimoidaan, jos ei käytetä sentrifugointivaiheita.
- Erittäin kätevä menetelmä.
- Vähemmän työlästä.
Kylmän trypsinisointimenetelmän päärajoitus on, että suuria määriä ei voida käyttää yhdessä tapauksessa.
Mitkä ovat samankaltaisuudet lämpimän ja kylmän trypsinisoinnin välillä?
- Sekä lämmin että kylmä trypsinisointiprosessit käyttävät trypsiini-entsyymiä solujen hajoamiseen.
- Sekä lämpimää että kylmää trypsinisaatioprosesseja käytetään soluviljelymenetelmissä solujen hajottamiseksi.
- Sekä lämpimän että kylmän trypsinisoinnin hoitomenetelmissä solut johdetaan supernatantista.
Mikä on ero lämpimän ja kylmän trypsinisoinnin välillä?
Lämmin vs kylmä trypsinisointi | |
| Lämmin trypsinisointi on menetelmä solujen käsittelemiseksi trypsiinillä lämpimissä olosuhteissa lämpötilassa 36,5 - 37 ° C 0. | Kylmä trypsinisointi on trypsiinikäsittelyprosessi, joka tapahtuu kylmimmissä olosuhteissa, mieluiten jäässä pitäen erittäin alhaiset lämpötilat. |
| protokolla | |
| Hienonnetut kudospalat pidetään 37 ° C: ssa 0C jatkuvasti koko menettelyn ajan. | Hienonnettuja kudospalat pidetään aluksi jääkylmissä lämpötiloissa ja pidetään sitten 37 ° C: ssa 0. |
| Lämpötila | |
| Lämmin trypsinisointi tapahtuu lämpötilassa 36,5 - 37 ° C 0 | Kylmä trypsinisaatio tapahtuu jääkylmissä lämpötiloissa. |
| Kulutettu aika | |
| Koko prosessin (noin 4 tuntia) lämpimän trypsinoinnin vaaditaan vähemmän aikaa. | Pidempi aika (noin 6 - 24 tuntia) tarvitaan kylmään trypsinisointiin. |
| Elävien solujen saanto | |
| Alhainen lämmin trypsinisoituminen. | Korkea kylmä trypsinisaatio. |
| Sentrifugoinnin käyttö | |
| Sentrifugointia tarvitaan solujen hajoamiseen lämpimässä trypsinisaatiossa. | Sentrifugointia ei tarvita kylmässä trypsinoinnissa. |
| Kudoksen alkuperäinen määrä trypsinisointia varten | |
| Suurempaa määrää kudosta voidaan käyttää lämpimässä trypsinisoinnissa. | Pienempää määrää kudosta voidaan käyttää kylmässä trypsinisoinnissa. |
| Soluvaurio | |
| Korkea johtuen sentrifugoinnista lämpimässä trypsinisoinnissa. | Vähemmän kylmän trypsinisaation vuoksi. |
Yhteenveto - Lämmin vs. Kylmä trypsinisaation
Trypsinisointi on menetelmä proteiinia hajottavan entsyymin trypsiinin käyttämiseksi primääristen soluviljelmien hajottamiseksi ja valmistamiseksi soluviljelyprosessin aikana. Trypsinisoinnissa on kaksi päätekniikkaa, jotka perustuvat toimenpiteen aikana käytettyihin lämpötiloihin. Ne ovat lämpimiä ja kylmiä trypsinisointeja. Lämmin trypsinisointi suoritetaan 37 ° C: ssa 0C kun taas kylmä trypsinisointi suoritetaan jääkylmissä olosuhteissa. Vaikka kylmä trypsinisointi vie pidemmän ajan loppuun saattamiseen, sen sanotaan olevan korkeampi elinkykyisten solujen saanto. Tämä johtuu tosiasiasta, että soluvauriot minimoidaan kylmässä trypsinisoinnissa, koska siinä ei käytetä voimakkaita sentrifugointivaiheita. Tämä on ero lämpimän ja kylmän trypsinisoinnin välillä.
Viite:
1. ”Tryptinisaatio.” Trypsinisointi - yleiskatsaus | ScienceDirect-aiheet. Saatavilla täältä
2. ”Primäärinen soluviljely: 3 tekniikkaa (kaaviolla).” Biologinen keskustelu, 16. lokakuuta 2015. Saatavilla täältä
Kuvan kohteliaisuus:
1. 'Kokeile aktiivista sivustoa'By Fdardel - Oma työ, (CC BY-SA 3.0) Commons-Wikimedian kautta
