Ero RP HPLC n ja HIC n välillä

avainero RP HPLC: n ja HIC: n välillä on se RP HPLC käyttää polaarisempaa liikkuvaa vaihetta ja vähemmän polaarista stationäärivaihetta. Kun taas HIC käyttää hydrofobista kiinteää faasia, joka sallii hydrofobiset molekyylit kiinnittyä siihen.

Kromatografia on analyyttinen tekniikka, joka auttaa erottamaan seoksen komponentteihin. Ensin on liuotettava erotettava näyte liuokseen. Tätä liuos-aineseosta kutsutaan liikkuvaksi faasiksi. Sitten liikkuva vaihe johdetaan toisen materiaalin, jota kutsutaan kiinteäksi vaiheeksi, läpi. Kiinteä vaihe määrittää komponenttien erottelun. Erottelu tapahtuu johtuen materiaalin jakautumisesta liikkuvan vaiheen ja liikkumattoman vaiheen välillä.

SISÄLLYS

1. Yleiskatsaus ja keskeiset erot
2. Mikä on RP HPLC
3. Mikä on HIC?
4. Vertailu rinnakkain - RP HPLC vs. HIC taulukkomuodossa
5. Yhteenveto

Mikä on RP HPLC?

Termi RP HPLC tarkoittaa Käänteisen vaiheen korkea suorituskykyinen nestekromatografia. Se käsittää komponenttien erottamisen seoksessa hydrofobisuuden mukaan. Liikkuvan faasin hydrofobiset komponentit kytkeytyvät liikkumattoman faasin immobilisoituihin hydrofobisiin ligandeihin, kun taas hydrofiiliset komponentit eluoituvat kiinteän faasin läpi tarttumatta kiinteän faasin pintaan..

Kuva 01: HPLC-laite

Lisäksi tällä menetelmällä on enemmän toistettavuutta verrattuna muihin kromatografiamenetelmiin, ja se osoittaa myös laajan käytettävyyden. Siksi käytämme tätä menetelmää laboratorioissa yli 75%: iin kaikista HPLC-menetelmistä. Käytämme liikkuvana faasina suurimmaksi osaksi vesipitoista vesiseosta sekoittuvan polaarisen orgaanisen liuottimen kanssa. Siten se varmistaa liuoksessa olevien hydrofobisten komponenttien kiinnittymisen kiinteän faasin pintaan.

Mikä on HIC?

Termi HIC tarkoittaa Hydrofobinen vuorovaikutuskromatografia. Se on käänteisen vaiheen HPLC-tyyppi, ja tätä menetelmää käytetään pääasiassa suurten biomolekyylien, kuten proteiinien, erottamiseen. Tässä menetelmässä meidän on käytettävä vesipitoista väliainetta biomolekyylinäytteen valmistamiseksi. Se johtuu siitä, että orgaaniset liuottimet voivat aiheuttaa proteiinien denaturoinnin. Lisäksi tässä tekniikassa käytetään vuorovaikutusta suurten molekyylien välillä paikallaan olevan vaiheen hieman hydrofobisen pinnan kanssa. Lisäksi meidän on käytettävä korkeaa suolakonsentraatiota näytteessä, koska se rohkaisee proteiinia pysymään pakkauksessa; tätä prosessia kutsutaan suolaamiseksi. Vähentämällä suolakonsentraatiota vähitellen voimme saada biomolekyylit eluoitumaan erikseen niiden hydrofobisuuden perusteella.

Yleensä tämä menetelmä käyttää olosuhteita, jotka ovat päinvastaisia ​​kuin ioninvaihtokromatografia. Tässä tekniikassa meidän on ensin johdettava puskuriliuos pylvään läpi, jotta näytteessä olevan liuenneen aineen liukeneminen voidaan vähentää. Se saa paljastamaan proteiinin hydrofobiset alueet. Kuitenkin, kun molekyyli on hydrofobisempaa, sitoutumisen edistämiseksi tarvitaan vähemmän suolaa. Tässä eluoidaan ensin vähemmän hydrofobisia liuenneita aineita, ja suolakonsentraation muutoksen mukaan enemmän hydrofobisia liuenneita aineita eluoituu viimeksi.

Mikä on ero RP HPLC: n ja HIC: n välillä?

Kromatografia on analyyttinen tekniikka komponenttien erottamiseksi seoksessa. RP HPLC ja HIC ovat kaksi erikoistunutta kromatografista tekniikkaa. Avainero RP HPLC: n ja HIC: n välillä on se, että RP HPLC käyttää polaarisempaa liikkuvaa vaihetta ja vähemmän polaarista stationäärifaasia, kun taas HIC käyttää hydrofobista stationäärifaasia, jonka avulla hydrofobiset molekyylit voivat kiinnittyä siihen.

Alla oleva infografia esittää yhteenvedon RP HPLC: n ja HIC: n erotuksesta.

Yhteenveto - RP HPLC vs. HIC

Kromatografia on analyyttinen tekniikka komponenttien erottamiseksi seoksessa. RP HPLC ja HIC ovat kaksi erikoistunutta kromatografista tekniikkaa. Avainero RP HPLC: n ja HIC: n välillä on se, että RP HPLC käyttää polaarisempaa liikkuvaa vaihetta ja vähemmän polaarista stationäärifaasia, kun taas HIC käyttää hydrofobista stationäärifaasia, joka sallii hydrofobiset molekyylit kiinnittyä siihen.

Viite:

1. ”HPLC-erottelutilat”. Vesi, saatavana täältä.

Kuvan kohteliaisuus:

1. ”Preparative HPLC” kirjoittanut GYassineMrabetTalk & # x2709; Tämä W3C-määrittelemätön vektorikuva on luotu Inkscapella. - Oma työ (CC BY 3.0) Commons Wikimedian kautta