Ero Phusionin ja Taq-polymeraasin välillä

Avainero - Phusion vs Taq polymeraasia
 

DNA-polymeraaseja käytetään laajasti entsyymeinä molekyylibiologian tekniikoissa, ja niitä on myös luonnollisesti läsnä kaikissa organismeissa, jotka läpikäyvät DNA: n replikaation. Ne ovat avain polymeroivia entsyymejä, jotka osallistuvat replikaation aikana. DNA-polymeraasi kykenee lisäämään nukleotidejä DNA-juosteen vapaaseen 3'-päähän aiheuttaen siten uuden juosteen jatkamisen. Tällä hetkellä, johtuen molekyylibiologian kehityksestä sairauksien diagnosoinnissa ja teollisissa sovelluksissa, on tärkeää valmistaa polymeraaseja, joilla on erilaisia ​​hyödyllisiä ominaisuuksia. Tämä lisää menetelmän tarkkuutta ja tekee siitä nopeamman tekniikan. Phusion ja Taq-polymeraasi ovat kaksi kaupallisesti tuotettua lämpöstabiilia polymeraasientsyymiä, joita käytetään erityisissä molekyylisovelluksissa. Phusion on DNA-polymeraasi, joka on eristetty Pyrococcus furiosus ja sitä käytetään pääasiassa kloonauskokeissa uskollisuuden lisäämiseksi. Taq DNA-polymeraasi on standardi DNA-polymeraasi, jota käytetään polymeraasiketjureaktiossa (PCR), ja se eristetään lämpöstabiilista bakteerista; Thermus aquaticus. avainero kahden entsyymin välillä on lähde-mikro-organismi. Fuusio eristetään ekstremofiilistä, Pyrococcus furiosus kun taas Taq-polymeraasi eristetään termofiilistä, Thermus aquaticus.

SISÄLLYS

1. Yleiskatsaus ja keskeiset erot
2. Mikä on fuusio
3. Mikä on Taq-polymeraasi
4. Phusionin ja Taq-polymeraasin väliset yhtäläisyydet
5. Vertailu rinnakkain - Phusion vs Taq -polymeraasi taulukkomuodossa
6. Yhteenveto

Mikä on Phusion?

Fuusio-DNA-polymeraasi on uusi polymeraasi, joka valmistetaan eristämällä entsyymi Pyrococcus furiosus, joka on ekstremofiilinen Archaea. Nämä mikrobit sijaitsevat erittäin korkeissa lämpötiloissa, mikä tekee polymeraasista erittäin lämpöstabiilin polymeraasin. Fuusiopolymeraasia käytetään äärimmäisen uskollisuuden aikaansaamiseen tavanomaisessa lämpöstabiilissa polymeraasissa; Taq-polymeraasi. Fuusiopolymeraasi pystyy monistamaan pitkiä templaatteja jopa 7,5 kb: n genomiseen DNA: han. Phusion-polymeraasin optimaalinen polymerointikapasiteetti on 72 ° C⁰ C. Phusionia käytetään myös kloonaustuotteissa sekvensointiin, ekspressioanalyysiin ja mutaatioanalyysiin.

Fuusio-DNA-polymeraasilla on 3 '- 5' eksonukleaasiaktiivisuus. Tämä mahdollistaa juuri syntetisoidun juosteen oikolukituksen synteesin jälkeen. Siksi nukleotidien epäsovitukset on helppo korjata. Siksi sillä on alhaisempi virheaste. Phusion-polymeraasin yleiset edut ovat;

• Äärimmäinen uskollisuus
• Suuri nopeus ja lyhyempi pidennysaika
• Vahvat reaktiot ja vaativat minimaalista optimointia
• Korkea tuotto

Kuva 01: Fuusio

Phusion-polymeraasin tärkein haittapuoli on, että se inhiboidaan deoksiuridiinitrifosfaatin (dUTP) läsnä ollessa. Kun dUTP: t kertyvät reaktioseokseen, se voi estää Phusion-polymeraasin vaikutuksia. Tämä estetään käsittelemällä reaktioseos dUTPaasilla ennen entsyymin lisäämistä. Nykyään PhU-polymeraasin dUTP-resistenttiä varianttia, joka tunnetaan nimellä Pfu Turbo, käytetään Phusion-polymeraasin sijasta tämän ongelman ratkaisemiseksi..

Mikä on Taq-polymeraasi?

Taq-DNA-polymeraasi Keksintö on mullistanut molekyylibiologian alan. Se ratkaisi merkittävän ongelman DNA: n monistuksessa. Taq DNA-polymeraasi on lämpöstabiili polymeraasientsyymi, joka uutetaan ja eristetään termofiilisestä bakteerista, Thermus aquaticus. Tämän entsyymin löytäminen johtaa PCR: n kehitykseen. Tämä entsyymi on mahdollistanut polymeraasiketjureaktion käytön DNA: n monistuksessa tavanomaisen vaivalloisen kloonaustekniikan sijasta. PCR: ää käytetään nyt molekyylidiagnostiikassa, maataloudessa ja teollisuudessa, ja tekniikkaan on lisätty monia uusia variaatioita.

Kuva 02: Taq-polymeraasi

Taq-DNA-polymeraasi toimii optimaalisella lämpötila-alueella 72 ° C: n välillä⁰C - 80⁰C. Taq-DNA-polymeraasi vaatii kertoimen; magnesium sen toiminnalle. Taq-polymeraasilla ei ole 3 '- 5' -korjauskykyä, joten Taq-DNA-polymeraasin virhetaso on korkea verrattuna uudempiin DNA-polymeraasityyppeihin, kuten Phusion-polymeraasi jne., Mutta Taq-DNA-polymeraasin suosio on edelleen samat kaikkialla tiedemaailmassa entsyymin mukavuuden ja joustavuuden vuoksi.

Mitkä ovat yhtäläisyydet Phusionin ja Taq-polymeraasin välillä?

• Sekä Phusion- että Taq-polymeraasientsyymit ovat polymeroivia entsyymejä, jotka kykenevät lisäämään nukleotideja DNA-juosteen 3'-vapaaseen päähän.
• Sekä Phusion- että Taq-polymeraasit vaativat alukesekvenssin polymeroinnin aloittamiseksi.
• Sekä Phusion- että Taq-polymeraasit ovat lämpöstabiileja.
• Sekä Phusion- että Taq-polymeraaseja käytetään PCR-mekanismeissa DNA: n monistamiseksi.
• Kun lisätään polymeraasia reaktioseokseen, sekä Phusion- että Taq-polymeraaseja lisätään viimeiseksi entsyymin tehokkuuden varmistamiseksi.
• Sekä Phusion- että Taq-polymeraasit syntetisoidaan kaupallisesti molekyylibiologian kokeellisiin tarkoituksiin.
• Sekä Phusion- että Taq-polymeraasit vaativat kofaktorin toiminnan suorittamiseksi.

Mikä on ero fuusion ja Taq-polymeraasin välillä?

Phusion vs Taq -polymeraasi
Phusion on DNA-polymeraasi, joka on eristetty Pyrococcus furiosus ja sitä käytetään pääasiassa kloonauskokeissa uskollisuuden lisäämiseksi.	Taq DNA-polymeraasi on standardi DNA-polymeraasi, jota käytetään polymeraasiketjureaktiossa (PCR), ja se eristetään lämpöstabiilista bakteerista, Thermus aquaticus.
Lähdeorganismi
Fuusio uutetaan äärimmäisistä arkaaoista - Pyrococcus furiosus.	Nämä kirjalliset teokset ulottuvat kolonisaatiokaudesta dekolonisaatiokauteen.
Oikolukemiskyky
3 '- 5' todistuslukutaito on läsnä Phusionissa.	3–5-todistelukemiskyky puuttuu Taq-polymeraasissa.
tarkkuus
Hyvä uskollisuus on siellä Phusionin kanssa.	Taq-polymeraasi osoittaa matalaa tarkkuutta.
Amplification
Phusion kykenee monistamaan pitkiä DNA-fragmentteja.	Taq-polymeraasi pystyy monistamaan paljon lyhyempiä DNA-fragmentteja.
dUTP Myrkytys
Fuusioaktiivisuutta estää kertyminen pariton.	DUPT ei estä Taq-polymeraasia.

Yhteenveto - Phusion vs Taq polymeraasia

Phusion ja Taq DNA-polymeraasi ovat kaksi lämpöstabiilia polymeraasia, joita käytetään PCR-tekniikoissa. Phusion on polymeraasi, joka on eristetty ekstremofiilistä, Pyrococcus furiosus kun taas Taq on eristetty lämpöstabiileista bakteereista Thermus aquaticus. Taq-DNA-polymeraasin löytäminen johtaa PCR-keksintöön. Phusionilla on monia etuja Taq: iin verrattuna, mikä on tehnyt Phusionista paremman vaihtoehdon erittäin tarkan DNA: n tuottamisessa. Taq-polymeraasia käytetään kuitenkin edelleen tavallisena polymeraasientsyyminä PCR: ssä. Tämä on ero Phusion- ja Taq-polymeraasien välillä.

Viite:

1.Biolabs, Uusi Englanti. "Taq DNA-polymeraasit." New England Biolabs: reagenssit biotieteiden teollisuudelle. Saatavilla täältä  
2. ”Fuusio-DNA-polymeraasi.” New England Biolabs. Saatavilla täältä 

Kuvan kohteliaisuus:

1.'GAM kuvaa Nivin Nasri'By NivinN - Oma työ, (CC BY-SA 4.0) Commons Wikimedian kautta  
2.'Taq'By Adenosine - Oma työ, (CC BY-SA 3.0) Commons Wikimedian kautta