Ero GFP n ja EGFP n välillä

avainero välillä GFP ja EGFP on, että GFP on villityyppinen proteiini, joka sisältyy ei-nisäkässolujen molekyylikloonaukseen, kun taas EGFP on parannettu tai muokattu GFP-tyyppi, jota voidaan käyttää nisäkässoluissa.

Molekulaarinen kloonaus on edistyksellinen tekniikka, jota tutkijat käyttävät valtavasti proteiinien ilmentämiseen yhdistelmäteknologian avulla. Rekombinantti-DNA-tekniikassa on välttämätöntä muuntaa rekombinanttivektori onnistuneesti isäntäorganismiin. Siksi transformaatioprosessin aikana tulisi tunnistaa ja vahvistaa, onko mielenkiinnon kohteena oleva geeni transformoitu vai ei isännälle. Tämän arvioimiseksi molekyylibiologit omaksuvat useita tekniikoita. Näistä tekniikoista yksi on reportterigeeni. Nämä reportterigeenit toimivat valittavina markkereina oikeiden transformanttien valitsemiseksi. Siten vihreä fluoresoiva proteiini (GFP) ja tehostettu vihreä fluoresoiva proteiini (EGFP) ovat kaksi reportteriproteiinia, joita käytetään molekyylikloonauksessa.

SISÄLLYS

1. Yleiskatsaus ja keskeiset erot
2. Mikä on GFP
3. Mikä on EGFP
4. Yhdenmukaisuudet GFP: n ja EGFP: n välillä
5. Vertailu rinnakkain - GFP vs. EGFP taulukkomuodossa
6. Yhteenveto

Mikä on GFP?

GFP on villityyppinen proteiini, joka sisältää 238 aminohappotähdettä ja useita aminohapposekvenssien valittavissa olevia alueita, jotka erottavat sen muista fluoresoivista proteiineista. Lisäksi tämä villityyppinen proteiini oli alun perin erillään Aequorea Victoria; eräänlainen meduusa. Luonnonilmiöissä meduusat kuitenkin pystyivät tuottamaan vihreän fluoresenssin vastauksena tiettyihin ärsykkeisiin.

Aikaisemmin tämä käsite yllätti tutkijat, ja he päättivät käyttää sitä yhdistelmä-DNA-tekniikoissaan. Tämän seurauksena tutkijat käyttivät tätä villityyppisen geenin mutanttimuotoa reportterigeeninä geeniekspressiotutkimuksissaan. GFP: n villityyppinen geeni kykenee tuottamaan proteiinia, joka antaa fluoresenssia huoneenlämpötilassa tai UV-valossa. Siksi insertoituna transformanteihin se ilmentää ja tuottaa fluoresenssia. Jos fluoresenssi tuottaa muutosprosessin jälkeen, se vahvistaa muutosprosessin onnistumisen. Yksinkertaisin sanoin fluoresenssiemissio merkitsee kiinnostuksen kohteena olevan geenin isäntään kuljettavan vektorin onnistunutta transformaatiota.

Kuva 01: GFP

Tästä syystä GFP toimii in vivo geeniekspression merkki. Tällä hetkellä geenitekniikan tekniikoita käytetään GFP: n tuottamiseen. Lisäksi on saatavana monia parannettuja GFP-versioita, kuten EGFP. Siksi tämä mahdollistaa GFP: n tehokkaan käytön molekyylikloonauksessa ja geeniekspressiotutkimuksissa.

Mikä on EGFP?

Parannettu vihreä fluoresoiva proteiini tai EGFP on parannettu versio GFP: stä. Yksinkertaisin sanoin voimme määritellä EGFP: n suunnitelluna versiona villityypin GFP: stä. Kun GFP: n villityyppinen geeni mutatoituu, sillä on hyödyllisiä vaikutuksia. Siksi GFP: n mutatoitu geeni sallii uusien merkkien ekspression, ja sen seurauksena voimme tuottaa parannettua GFP: tä, jolla on parannetut ominaisuudet. Lisäksi voimme viedä mutaatiot onnistuneesti villityypin GFP-geeniin säteilyttämällä tai kemiallisilla menetelmillä. Nämä mutatoituneet geenit tuottavat sitten EGFP: n, jolla on edullisempia ominaisuuksia.

Kuvio 02: EGFP

EGFP: n parannetut ominaisuudet ovat seuraavat;

• Pystyy lähettämään voimakkaampia fluoresenssisignaaleja.
• On korkea herkkyys.
• Voi käyttää sitä nisäkässoluissa prokaryoottien ja muiden alemman tason eukaryoottien sijasta.
• Tarjoaa myös lisääntyneen tuotteen puhtauden.

Siksi verrattuna GFP: hen EGFP on edullinen valinta geeniekspressiotutkimuksissa. Tuote on kuitenkin kalliimpi kuin GFP.

Mitkä ovat samankaltaisuudet GFP: n ja EGFP: n välillä??

• GFP ja EGFP ovat kaksi proteiinia, joilla on kyky emittoida vihreää väriä
• Siksi molemmat toimivat reportteriproteiineina geeniekspressiotutkimuksissa.
• Lisäksi on mahdollista syntetisoida molemmat käyttämällä yhdistelmä-DNA-tekniikkaa.
• Lisäksi on helppo mutatoida edelleen näitä kahta tyyppiä parannettujen muotojen syntetisoimiseksi.

Mikä on ero GFP: n ja EGFP: n välillä??

Reportterigeeni on geeni, joka kiinnittyy kiinnostuksen kohteena olevaan geeniin yhdistelmä-DNA-tekniikassa. Se osoittaa rekombinanttivektorin onnistuneen transformoinnin isännäksi. Tässä GFP ja EGFP ovat kahden tyyppisiä vihreitä fluoresoivia proteiineja, jotka toimivat reportteriproteiineina. Tärkein ero GFP: n ja EGFP: n välillä on kuitenkin se, että GFP on villityyppi, kun taas EGFP on suunniteltu versio GFP: stä. Lisäksi EGFP: llä on hyödyllisempiä ominaisuuksia kuin GFP: llä. Esimerkiksi EGFP tuottaa voimakkaampaa fluoresoivaa valoa ja on herkempi kuin GFP. Toinen ero GFP: n ja EGFP: n välillä on järjestelmissä, joissa näitä voidaan käyttää. Muiden kuin nisäkkäiden järjestelmät käyttävät GFP: tä, kun taas nisäkäsjärjestelmät käyttävät EGFP: tä.

Seuraava infografia esittää GFP: n ja EGFP: n välisen eron taulukkomuodossa.

Yhteenveto - GFP vs. EGFP

GFP ja EGFP ovat reportteriproteiineja molekyylikloonauksessa ja geeniekspressiotutkimuksissa. GFP on villityyppinen proteiini, joka on vihreä fluoresoiva proteiini. Proteiini oli alun perin erillään meduusasta Aequorea victoria. Sitä vastoin EFGP on parannettu muoto GFP-proteiinia. Se on villityyppinen mutantti, jolla on parannetut ominaisuudet. Siksi EFGP: llä on korkeampi signaalin voimakkuus ja korkeampi herkkyys. Siksi voimme käyttää sitä nisäkkäiden vektoreissa. Sitä vastoin GFP: tä käytetään pääasiassa vain muissa kuin nisäkkäiden vektoreissa. Kaiken kaikkiaan tämä on ero GFP: n ja EGFP: n välillä.

Viite:

1.Cinelli, RA, et ai. "Parannettu vihreä fluoresoiva proteiini välineenä proteiinin dynamiikan ja lokalisaation analysoinnissa: Paikallinen fluoresenssitutkimus yksimolekyylitasolla." Valokemia ja fotobiologia., Yhdysvaltain kansallinen lääketieteellinen kirjasto, kesäkuu 2000. Saatavana täältä  
2. ”PDB101: Kuukauden molekyyli: Vihreä fluoresoiva proteiini (GFP).” RCSB: PDB-101. Saatavilla täältä

Kuvan kohteliaisuus:

1. ”GFP-fluoresoiva proteiinielokuva”, kirjoittanut Erin Rod - Oma työ, (CC BY-SA 4.0) Commons Wikimedian kautta 
2. ”CA2 amigo2 eGFP -hiiri” Dudek, Serena; Curuana, Douglas; Carstens, Kelly - Oma työ, (CC BY-SA 3.0) Commons Wikimedian kautta