Ero kloonauksen ja alakloonauksen välillä

Keskeinen ero - kloonaus vs subkloonaus
 

Kloonaus ja alakloonaus ovat molekyylibiologisia menetelmiä, jotka luovat geneettisesti identtisiä soluja tai organismeja, joissa on kiinnostava DNA tai geeni. Kloonaus on tekniikka, joka sisältää kiinnostuksen kohteena olevan geenin tai DNA: n insertoinnin vektoriin, sen replikaation isäntäbakteerissa ja solujen tai organismien tuottamisen, jotka ovat tarkkoja kopioita geneettisestä muodosta. Alikloonaus on tekniikka, johon sisältyy mielenkiinnon kohteena olevan geenin insertointi, joka on jo insertoitu vektoriin, sekundaariseen vektoriin, sen replikaatio isäntäbakteerissa ja geneettisesti identtisten kopioiden tuottaminen soluista tai organismeista. Keskeinen ero kloonauksen ja subkloonauksen välillä on se, kloonauksessa mielenkiinnon kohteena oleva geeni, kun se on ligatoitu vektoriin, jatkaa kloonausprosessia, kun taas alakloonauksessa jo kiinnitetty mielenkiintoinen geeni erotetaan kantavektorista ja insertoidaan uudelleen vastaanottajavektoriin ja jatketaan prosessia.

SISÄLLYS
1. Yleiskatsaus ja keskeiset erot
2. Mikä on kloonaus
3. Mikä on subkloonaus
4. Vertailu rinnakkain - kloonaus vs subkloonaus
5. Yhteenveto

Mikä on kloonaus?

Kloonaus on menetelmä, joka tuottaa geneettisesti identtisiä organismeja tai soluja. Luonnossa kloonaus tapahtuu epäseksuaalisen lisääntymisen avulla. Kun ei ole geneettistä rekombinaatiota tai muutosta, tytärisolut saavat saman vanhemman geneettisen koostumuksen. Prokaryoottiset ja eukaryoottiset organismit luovat klooneja binaarisen fission, orastuksen, mitoosin jne. Avulla. Molekyylibiologiassa kloonausgeenit tai DNA: n spesifiset fragmentit ovat suosittu menetelmä tutkia kyseisen DNA-osan rakennetta ja toimintaa.

Molekyylin kloonauksen päätavoite on tehdä miljoonia kopioita geneettisesti identtisistä soluista tai organismeista, joissa on kiinnostava DNA-fragmentti (pääasiassa geenejä). Se luo organismeja, joilla on tarkat geneettiset kopiot toisesta. Ensisijaisesti spesifiset geenit kloonataan molekyylitutkimuksissa rakenteellisen ja toiminnallisen tiedon saamiseksi ja DNA-sekvensointia varten. Kloonausta käytetään myös laajasti spesifisten proteiinien tai suurten mittakaavojen tuotteiden valmistukseen.

Kloonausmenettely

Kloonausproseduurin perusvaiheet ovat seuraavat.

1. Kiinnostavan geenin tunnistaminen ja eristäminen. (Kiinnostavan geenin monistus PCR: llä).
2. Kiinnostavan geenin restriktiohajotus (Restriktioendonukleaasi katkaisee geenin).
3. Vektori-DNA: n pilkkomisen rajoittaminen. (Vektori-DNA leikataan myös käyttämällä samaa restriktioendonukleaasia).
4. Geenin insertointi vektoriin ja rekombinanttimolekyylin muodostuminen.
5. Rekombinanttivektorin transformaatio isäntäbakteereksi.
6. Transformoituneiden bakteerien eristäminen ja tunnistaminen (plasmidivektorin tulisi sisältää valittavissa oleva geeni, tavallisimmin antibioottiresistenssigeeni transformoitujen bakteerien seulomiseksi).
7. Rekombinantti geeniekspressio isännässä.

Kuva_01: kloonausmenettely

Mikä on subkloonaus?

Alikloonaus on menettely mielenkiinnon kohteena olevan geenin siirtämiseksi yhdestä vektorista toiseen vektoriin geenin ilmentymisen näkemiseksi geenin halutun toiminnallisuuden saavuttamiseksi. Tässä menetelmässä on mukana kaksi vektoria; nimittäin emovektori ja kohdevektori. Kloonatut insertit siirretään jälleen toiseen vektoriin alakloonauksessa. Geenin siirron tavoitteena ensimmäisestä vektorista toiseen vektoriin on saada aikaan jotain, mitä ensimmäinen vektori ei pystynyt tekemään, tai erottaa geeni uudelleen jo kloonatun DNA-fragmentin sisällä ja ekspressoida se yksin. Restriktioentsyymejä käytetään tässä menettelyssä alussa.

Subkloonausmenettely

Alakloonauksen perusvaiheet ovat seuraavat.

1. Restriktioendonukleaasien avulla kiinnostavan DNA: n erottaminen luovuttajaplasmidista (kantavektori).
2. Kiinnostavan DNA: n monistus PCR: llä.
3. PCR-tuotteen (mielenkiinnon kohteena oleva DNA) puhdistaminen geelielektroforeesilla.
4. Vastaanottajaplasmidin avaaminen samoilla restriktioendonukleaaseilla, joita käytetään mielenkiinnon kohteena olevan DNA: n erottamiseen emäplasmidista.
5. Kiinnostavan DNA: n (geenin) ligaatio vastaanottajaplasmidiin alakloonatun plasmidin luomiseksi.
6. Alakloonatun vektorin transformaatio toimivaltaiseksi isäntäbakteereksi.
7. Transformoitujen solujen seulonta.
8. Plasmidi-DNA: n puhdistus ja käyttö DNA-sekvensointiin tai geenien ilmentämiseen haluttujen tuotteiden saamiseksi.

Alikloonaus suoritetaan silloin, kun eristetään yksi geeni kloonatusta geeniryhmästä tai kun mielenkiinnon kohteena olevaa geeniä tarvitaan siirtämään käyttökelpoiseen plasmidiin nähdäkseen mielenkiinnon kohteena olevan geenin tarkan toiminnan.

Kuva_02: Subkloonausmenettely

Mitä eroa kloonauksen ja subkloonauksen välillä on??

Kloonaus vs. subkloonaus
Kloonaus on menetelmä, joka tuottaa geneettisesti identtisiä organismeja tai soluja.	Alikloonaus on menettely mielenkiinnon kohteena olevan geenin siirtämiseksi yhdestä vektorista toiseen vektoriin geenin ilmentymisen näkemiseksi geenin halutun toiminnallisuuden saavuttamiseksi.
Käsitellä asiaa
Erota mielenkiinnon kohteena oleva DNA organismista ja insertoidaan vektoriin kerran ja kloonataan	Jo kloonattu DNA erotetaan ensimmäisestä vektorista, insertoidaan toiseen vektoriin ja kloonataan.
Lisää liike vektorien kautta
Ei liiku insertit (mielenkiinnon kohteena oleva DNA) yhdestä vektorista toiseen.	Siirrä lisäykset päävektorista kohdevektoriin.

Yhteenveto - kloonaus vs subkloonaus

Kloonaus luo geneettisesti identtisiä soluja tai organismeja kiinnitetyn geenin tai DNA: n kanssa. Se etenee kiinnostavan DNA: n erottamisen ja insertoinnin kautta vektoriin ja ilmentämisen isäntäbakteerissa. Subkloonaus jakaa samanlaiset vaiheet kloonauksen kanssa. Subkloonauksessa jo kloonattu DNA-fragmentti (mielenkiinnon kohteena oleva geeni) insertoidaan vektoriin ja transformoidaan isäntäbakteereksi. Se on keskeinen ero kloonauksen ja subkloonauksen välillä.

Viitteet

1. Lodish, Harvey. "DNA-kloonaus plasmidivektoreilla." Molekyylisolubiologia. 4. painos. Yhdysvaltain kansallinen lääketieteellinen kirjasto, 1. tammikuuta 1970. Web. 5. maaliskuuta 2017
2. ”Alakloonaus.” Wikipedia. Wikimedia-säätiö, 14. helmikuuta 2017. Web. 6. maaliskuuta 2017
3. ”Alakloonaus.” Subkloonaus | Open Access -artikkelit | Open Access -lehdet | Konferenssijulkaisut | Toimittajat | Tekijät | Arvioijat | tieteelliset tapahtumat. N.p., n.d. Web. 6. maaliskuuta 2017
4. Wackerhage, Henning. "Kuinka subkloonata." Kuinka subkloonata. N., 1. tammikuuta 1970. Web. 6. maaliskuuta 2017

Kuva kohteliaisuus

1. Molekulaarinen kloonausmenettely - CNX OpenStax [CC BY 4.0], Wikimedia Commonsin kautta
2. Alikloonausmenettely - Alkuperäinen lähettäjä oli Takometer englanniksi Wikipediassa (siirretty en.wikipediasta Commonsiin.) [CC BY 2.5], Wikimedia Commonsin kautta