Ero Bradfordin ja Lowry-proteiinimäärityksen välillä

avainero bradfordin ja lowry-proteiinimäärityksen välillä on se Bradford-proteiinimääritys perustuu Coomassie-briljanttisinisen G-250 -väriaineen absorbanssinsiirtoon, kun taas Lowry-proteiinimääritys perustuu kupari-ionien (Cu +) -ionien reaktioon, joka syntyy hapettamalla peptidisidoksia Folin-Ciocalteu-reagenssilla..

Määritys on analyyttinen tekniikka, joka auttaa karakterisoimaan näytteen tärkeimmät toiminnalliset komponentit. Siksi määritys voisi olla joko kvalitatiivinen tai kvantitatiivinen testi. Monilla aloilla, mukaan lukien laboratoriolääketiede, farmakologia, ympäristöbiologia, molekyylibiologia, biokemia ja immunologia, käytetään tällaisia ​​määrityksiä rutiininomaisesti. Bradford- ja Lowry-proteiinimääritykset ovat kaksi biokemiallista määritystä, jotka määrittävät proteiinipitoisuuden näyteliuoksessa. Molemmissa määrityksissä käytetään kolorimetrisiä tekniikoita tulosten tuottamiseksi.

SISÄLLYS

1. Yleiskatsaus ja keskeiset erot
2. Mikä on Bradfordin proteiinimääritys
3. Mikä on Lowry-proteiinimääritys
4. Bradfordin ja Lowry-proteiinimäärityksen väliset yhtäläisyydet
5. Vertailu rinnakkain - Bradford vs. Lowry-proteiinimääritys taulukkomuodossa
6. Yhteenveto

Mikä on Bradford Protein Assay?

Bradford-proteiinimääritys on nopea spektroskooppinen analyyttinen menetelmä proteiinianalyysille. Se osoittaa suurta tarkkuutta mittaamalla proteiinipitoisuutta liuoksessa. Marion Bradford otti tämän menetelmän käyttöön vuonna 1976. Tässä määrityksessä kokonaisreaktio perustuu mitattujen proteiinien aminohappokoostumukseen. Toisin sanoen Bradford-proteiinimääritys on kolorimetrinen määritys. Se käyttää väriainetta Coomassie briljanttisininen. Siksi tämä kolorimetrinen proteiinimääritys riippuu väriaineen absorbanssinsiirrosta. Coomassie-briljanttisininen G-250 esiintyy kolmessa muodossa: kationinen (punainen), anioninen (sininen) ja neutraali (vihreä). Happamissa olosuhteissa väriaineen punainen muoto muuttuu siniseksi. Se vahvistaa proteiinin sitoutumisen. Jos proteiinia ei ole läsnä, liuos voi jäädä ruskeana.

Kuvio 01: Bradford-proteiinimääritys

Bradford-proteiinimääritys eroaa muista proteiinimäärityksistä, koska se on vähemmän herkkä proteiiniliuoksessa olevien erilaisten kemiallisten yhdisteiden häiriöille. Nämä yhdisteet sisältävät natriumin, kaliumin, glukoosin ja sakkaroosin jne.

Mikä on Lowry-proteiinimääritys?

Lowry-proteiinimääritys on biokemiallinen määritys, jota käytetään määrittämään proteiinin kokonaispitoisuus liuoksessa. Oliver H. Lowry on henkilö, joka kehitti tämän reagenssin vuonna 1940. Menetelmä kuvaa liuoksen kokonaisproteiinipitoisuutta värinmuutoksella, joka on verrannollinen liuoksen proteiinipitoisuuteen. Siksi tämä on myös kolorimetrinen proteiinimääritys.

Peptidisidosten ja Folin-Ciocalteu-reagenssin hapettumisella aikaansaatujen kupari-ionien (Cu +) välinen reaktio on tämän menettelyn perusta. Tämä reagenssi sisältää myös fosfomolybdeenihappoa ja fosfori-volframihappoa. Lowry-proteiinimäärityksen reaktiomekanismia ei kuitenkaan tunneta hyvin. Mutta siihen sisältyy kysteiini-, tryptofaani- ja tyrosiinitähteiden hapettuminen vähentämällä Folin-Ciocalteu-reagenssia..

Kuvio 02: Lowry-proteiinimääritys

Kysteiinitähteet myötävaikuttavat Lowry-proteiinimäärityksessä havaittuun absorbanssiin ja reaktio johtaa loistavaan siniseen molekyyliin; heteropoly molybdeeni sininen. Tämän molekyylin pelkistys mitataan absorbanssilla 660 nm: ssä. Siksi kysteiini- ja tryptofaanitähteiden konsentraatio, joka vähensi Folin-Ciocalteu-reagenssia, päättelee proteiinin kokonaispitoisuuden liuoksessa.

Mitkä ovat samankaltaisuudet Bradfordin ja Lowry-proteiinimäärityksen välillä?

• Bradford- ja Lowry-proteiinimääritykset määrittävät proteiinipitoisuuden liuoksessa.
• Molemmat menetelmät ovat kolorimetrisiä menetelmiä.
• Myös molempien menetelmien herkkyys on korkea.

Mikä on ero Bradfordin ja Lowry-proteiinimäärityksen välillä?

Bradford- ja Lowry-proteiinimääritykset ovat kahden tyyppisiä määrityksiä, jotka määrittävät proteiinipitoisuuden liuoksessa. Bradford-proteiinimääritys perustuu Coomassie-briljanttisinisen G-250 -värin absorbanssinsiirtoon, kun taas Lowry-proteiinimääritys riippuu kupari-ionien reaktiosta, joka syntyy peptidisidosten hapetuksella, Folin-Ciocalteu-reagenssin kanssa. Joten, tämä on avainero Bradfordin ja Lowry-proteiinimäärityksen välillä. Bradford-proteiinimääritys kestää 15 minuuttia tuloksen tuottamiseksi, kun taas Lowery-proteiinimääritys kestää 40-60 minuuttia tuloksen tuottamiseksi. Siksi tämä on toinen ero Bradfordin ja Lowry-proteiinimäärityksen välillä. Lisäksi Bradford-proteiinimääritys on riippuvainen aminohappokoostumuksesta, kun taas Lowry-proteiinimääritys on osittain riippuvainen aminohappokoostumuksesta. Siksi tämä on myös ero Bradfordin ja Lowry-proteiinimäärityksen välillä.

Inforafiikan alla on lisätietoja Bradford- ja Lowry-proteiinimäärityksen eroista.

Yhteenveto - Bradford vs. Lowry-proteiinimääritys

Määritys on analyyttinen tekniikka, jota käytetään näytteen pääfunktionaalisen komponentin karakterisointiin. Bradford- ja Lowry-proteiinimääritykset ovat kahden tyyppisiä proteiinimäärityksiä, jotka toimivat kolorimetristen tekniikoiden mukaisesti. Sekä Bradford- että Lowry-proteiinimääritykset määrittävät proteiinipitoisuuden liuoksessa. Avainero Bradfordin ja Lowry Protein Assayn välillä on kuitenkin heidän käyttämässään kolorimetrisessä tekniikassa. Bradford-proteiinimäärityksessä käytetään Coomassie-briljanttisinistä G-250, kun taas Lowry-proteiinimäärityksessä käytetään kupari-ioneja (Cu +) -ioneja ja Folin-Ciocalteu-reagenssia. Lisäksi Bradford-menetelmä antaa nopeita tuloksia kuin Lowry-proteiinimääritys. Molemmat menetelmät ovat kuitenkin erittäin herkkiä menetelmiä, ja ne saattavat häiritä eri aineita.

Viite:

1. ”Canadian Journal of Botany.” Canadian Journal of Botany - 60 (7): 1046 - PDF, saatavana täältä.
2. ”Proteiinimääritysten kemia.” Thermo Fisher Scientific - Yhdysvallat, saatavana täältä.

Kuvan kohteliaisuus:

1. Helito - "Bradford-proteiinimääritys" - Oma työ (CC BY-SA 4.0) Commons Wikimedian kautta